活性胶原蛋白肽的功效和作用，胶原蛋白肽什么时候喝的效果最好..

专利名称：胶原活性肽的制造方法及其制造方法及用途。

技术领域：

本发明属于活性肽开发领域，具体涉及以来源于的未变性胶原蛋白为原料，经过酶解等特殊学的寿命和具有褐形成抑制等特殊生理效果的胶原活性肽及其方法。

背景技术：

活性肽是指能够调节生物体代谢或具有某种特殊生理活性的肽类，其生理作用有免疫调节、激素调节、营养调节、提高免疫力、清除自由基、抗氧化、延缓衰老、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗凝血、降压等。胶原蛋白是一种主要的结构蛋白，广泛存在于动物细胞中，用于食品、美容、外用和植入物等生物医学材料中，是一种重要的活性分子。水解后的胶原蛋白产物含有多种具有不同生理效果的活性肽，在医疗、保健及美容方面具有良好的应用前景。在胶原蛋白肽及其生理功能的研究中，最早受到关注的是降压肽，其次是抗氧化肽。1979年，Oshima等利用细菌胶原酶水解明胶，从水解产物中分离出6种抑制血管紧张素转化酶（ACE）活性的肽，首次报道了胶原蛋白卵熊果蛋白的降压作用。之后，关于胶原肽的报告增多，奥利拉用16种酶对鲱鱼和猪皮的胶原蛋白进行酶分解，从加水分解液中分离出能够降低血压和自我去除的胶原肽，Saiga从鸡肉胶原酶分解物中发现了降低血压和抗氧化肽，Kim等人从阿拉斯加明太鱼的皮明胶中发现了降低血压和抗氧化肽。Mendis等人从皮皮西克的皮明胶加水分解物中得到了抗氧化肽。近年来，国内学者对胶原蛋白肽的研究也给予了高度重视，并相继公布了多项专利。

其中，CN1233840C与胶原肽的制备方法及产品有关，CN1404748A与蛋白质肽保健食品及其制备方法有关，CN1994133A与胶原肽在食品中的应用方法有关，CN1552889A与胶原肽的制备方法及使用有关。这些专利是以胶原蛋白为原料的，与海产品无关。胶原肽的化学特性和生物活性尚未报道。CN101061827A、CN1582771A、CN1814781A、CN100351272C分别涉及从鱼骨、鱼骨、鱼鳞和海星壳制备胶原肽的生产工艺和方法，但这些专利中没有详细报道这些胶原肽的生物活性;。 CN101091789A涉及海洋胶原肽在免疫调节剂和食品制备中的应用，通过鱼皮水解获得分子量为200-1000D的小分子肽，可增强小鼠迟发性过敏性和ConA刺激T淋巴细胞增殖，增加抗体产生细胞的数量。显著促进巨噬细胞去除碳颗粒的能力和鸡红细胞的吞噬能力。CN101061827A介绍了乌贼皮胶原活性肽的制备方法和应用，其特点是用热水提取胶原活性胶原肽的功效和作用，然后加入酶，用405TC水解，用9010TC消灭酶，用碱液调节pH值中性，过滤酶解液、超滤、钠滤。经真空浓缩及喷雾干燥得到的胶原肽具有抗氧化、降压、抗动脉粥样硬化及美容作用。然而，胶原蛋白肽在延长动物寿命或抑制动物体内棕色脂质形成方面的作用尚未被报道。

发明内容本发明的目的是提供一种胶原活性肽的方法，该方法具有抑制寿命和褐形成等特殊的生理功能，作为因子添加剂，能够应用于健康食品以及宠物的健康。为了达到上述目的，本发明的技术措施包括以下几个方面，本发明公开了一种特殊的胶原活性肽，该胶原活性肽是以水生动物来源的未变性胶原为原料，经过酶降解等特殊生化技术得到的，其主要成分的分子质量范围为5-13KD，氮溶解指数>98%。它具有特殊的生理作用，如显着延长动物的寿命，抑制体内脂质褐色的生成。另一方面，上述胶原活性肽的具体方法如下所示的1胶原的提取方法是，将原料清洗粉碎后，用5-15倍的净水和5%的溶液，分别除去水溶性和盐溶性的杂蛋白，除去杂蛋白后，用20倍的1%的胃蛋白酶溶液pH272，离心5000Xg，取清净夜，加入固体，使其达到2.5M，离心5000Xg，取沉淀，得到胶原粗品;（2）蛋白质加水分解产物的取得在中温条件下，使用不同酶切断部位的蛋白酶，控制未变性水产胶原进行加水分解，得到胶原加水分解产物。（3）胶原蛋白肽的制备将上述胶原蛋白水解产物透析并干燥，以获得胶原蛋白肽。

上述未变性胶原是指各种水产动物原料。（例如海洋及淡水鱼皮、头足类动物皮、贝类外套膜等）中提取得到的各种胶原质，其提取方法是清洗原料，用中性盐等去除原料中的非胶原质成分，然后通过低温酶分解法从原料中提取难溶性的胶原质，得到未变性的水产胶原质。得到上述胶原粗品后，用酸性溶液（如0.5M醋酸）溶解，透析外液中酸溶液（如0.5M醋酸）为48？72透析，得到理想的未变性I型胶原，直到透析液不再检测。透析后的胶原加水分解物，干燥前亲水性葡萄糖凝胶（Sephadex ？G50）既可以使用色谱，也可以不使用色谱，也可以进行精制。干燥方法可以是真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等，优选是冷冻干燥。 不同酶切割部位的蛋白酶均为食用级，均为来自动物、植物和微生物的酸性、中性和碱性蛋白酶，优选为食用级的胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。蛋白酶对胶原蛋白的降解温度控制在30-60℃的中温条件下，胶原蛋白的水解受到控制，该条件下胶原蛋白水解度一般在5-15%范围。实验验证表明，采用本发明方法制备的胶原活性肽具有显著延长动物寿命、抑制动物体内脂质褐质生成等功效。

另外，该胶原活性肽还具有通过离体抑制多酚氧化酶的活性。所得到的胶原活性肽作为功能因子添加剂在保健食品中具有广泛的应用。这些保健食品适合所有年龄层，特别是老年人，对延缓衰老和长寿都有一定的作用。也可作为宠物健康饲料添加剂，适用于各类宠物（如狗、猫、金鱼、鸽子、鹦鹉等鸟类等）的健康字料，最好用于价格昂贵的特种宠物字料，延长宠物的寿命。本发明具有以下特征和收益的一种本发明的原料是来自水的未变性胶原蛋白，水的包括海洋和淡水的足类皮、膜等。原料来源丰富，活性成分含量高，最终产品产量高;成本低，附加值高，市场前景广阔。（2）本发明公开的胶原活性肽产品，具有抑制体外多酚氧化酶活性、显著延长动物寿命、抑制动物体内脂质褐质生成的效果。（3）本发明公开的胶原活性肽的方法，使用的试剂全部为食用级，条件温和，在30-60° C条件下酶分解，食用安全性高，可以作为因子直接添加到健康食品特别是具有延迟老化和作用的高龄性健康食品中，也可以作为宠物健康添加剂，应用于宠物的健康型。过宠物的寿命。（4）本发明方法操作简单，设备投资少，适合工业化生产。

具体的实施方式。

以下通过具体的例子对本产品的制造方法进行说明，但是应该注意，本例子的目的是进一步说明和说明本发明，不限制本发明的保护范围。 实施例1（1）将清洗过的粉碎，5？用15倍的净水以及5倍的溶液，分别除去水溶性以及盐溶性异质蛋白质。（2）除去异质蛋白质后，用20倍1%胃蛋白酶溶液（pH2）进行72，离心（5000Xg），在洁净夜，将固体加入2.5M，离心（5000Xg），取沉淀，得到粗胶原质。（3）将胶原粗品溶解于0.5M醋酸中，将0.5M醋酸作为透析外液48？透析72h，从透析液中检测出Cr之前，得到了未变性I型胶原质。（4）将胶原分散到20倍量的纯水中，将pH调整为8，加热至50。C，40分钟保温后，按比例加入胰蛋白酶（酶对60U/g），进行酶分解，直至20分钟或加水分解度达到8%，得到胶原加水分解液。（5）将胶原加水分解液放入分子量2kD截断的透析袋中，将蒸馏水作为外液透析一夜后，冷冻干燥后胶原活性肽（CH ？1）得到葡聚糖凝胶（Sephadex ？G50）用色谱分离纯化，有效成分（CH ？l ？2）的分子量为7378D。

（6）将干燥的CH-1添加到营养培养基中，果蝇的平均寿命由对照组的52.3天延长到69.7天，达到33.3%，与维生素E的寿命延长效果（70.6天）相当。与此同时，果蝇的脂苯基含量从对照组的14.8%下降到11.1%。%，与维生素E的效果相同（10.7%）另外，CH-1在体外可显著抑制多酚氧化酶的活性，且其活性呈剂量依赖关系，CH-l浓度为2mg/m时，其活性达到相同剂量维生素C的33X;然而，当CH-l浓度为5mg/ml时，其活性是相同剂量维生素C的90%。实施例2将按照实施例l的（1）、（2）、（3）的步骤得到的未变性I型胶原分散到10倍量的水中，使pH值为2，使其为6-TC，按照实施例l的比例加入胃蛋白酶进行酶分解，酶分解到约40mins或加水分解度达到15倍。将胶原水解液放入分子量2kD截断的透析袋中，将蒸馏水作为外液透析一夜后，冷冻干燥得到胶原活性肽，右旋糖醇凝胶（Sephadex ？G50）色谱分离纯化，有效成分分子量为5021D。实施例3将按照实施例l的（1）、（2）、（3）的步骤得到的未变性I型胶原分散到10倍量的水中，pH值为2，按照实施例l的比例加入胃蛋白酶进行酶分解，将温度控制为3℃ TC，将酶分解控制到约40mins或加水分解度5为止。

（在此之前）将胶原加水分解液放入分子量2kD截断的透析袋中，将蒸馏水作为外液透析一夜后，冷冻干燥得到胶原活性肽，右旋糖酐凝胶（Sephadex ？G50）色谱分离纯化，有效成分分子量为5021D。实施例4将按照实施例l的（1）、（2）、（3）的步骤得到的未变性I型胶原分散到IO 倍量的水中，pH值为2，按照实施例1的比例加入胃蛋白酶进行酶分解，进行酶分解，直到酶分解约40分钟或加水分解度12%为止。将胶原加水分解液放入2kD的透析袋中，将蒸馏水作为外液进行一夜透析，冷冻干燥后胶原活性肽（CH ？（2）得到了。头孢菌素― G50色谱法测定有效成分（CH ―）2？ l）的分子量为12057D。将干燥CH-2添加到果蝇营养培养中，果蝇的平均寿命从对照组的52.3天延长到65.1天，比维生素E（70.6天）低5.5天。其中，姜的脂蛋白含量从对照组的14.8%下降到11.8%，略低于维生素E（10.7%）的效果。另外，CH-2能够显著阻碍in vitro的多酚氧化酶活性，其活性依赖于用量。当CH-2浓度为2mg/ml时，其活性达到相同剂量维生素C的40.4%，但当浓度增加到5mg/ml时，相同剂量维生素C的活性达到99.6W。

将在实施例5实施例l的（l）、（2）、 G）的工序中得到的未变性I型胶原分散到10倍量的水中，pH值为7，按照实施例1的比例加入木瓜进行酶分解，酶分解约为40分钟或加水分解度7%。将胶原加水分解液放入分子量2kD的透析袋中，将蒸馏水作为外液透析一夜后，冷冻干燥后胶原活性肽（CH ？（3）得到了。将干燥的CH-3添加到营养培养基中后，果蝇的平均 寿命从对照组的52.3天延长到67.2天，略低于维生素E（70.6天）的寿命。 与此同时，果蝇的脂苯基含量从对照组的14.8%下降到11.7%。而且，CH-3在in vitro中明显阻碍了多酚氧化酶活性，其活性依赖于用量。当CH-3浓度为2mg/ml时，其活性达到相同剂量维生素C的15.4%，但当浓度增加到5mg/ml时，其活性达到相同剂量维生素C的98.6%。

索赔的要求。

1、胶原活性肽的制备方法，其特征在于上述方法包括以下步骤（1）胶原提取其提取方法是，将原料清洗粉碎后，前后用5-15倍净水和5%NaCl溶液处理，分别去除水溶性和盐溶性的杂蛋白质。将去除杂蛋白质的鱼鳞用20倍1%的胃蛋白酶溶液（pH2）处理72小时，离心（5000×g），取清明，加入固体NaCl，将其浓度进行2.5M活性胶原肽的功效和作用（胶原蛋白质研究生申请的活性肽开发技术肽专利），离心（5000×g），取沉淀，得到胶原粗制品。（2）蛋白质加水分解产物的取得在中温条件下，使用不同酶切断部位的蛋白酶，控制未变性水产胶原进行加水分解，得到胶原加水分解产物。（3）胶原蛋白肽的制备将上述胶原蛋白水解产物透析并干燥，以获得胶原蛋白肽。

2.上述骨胶原为未变性I型骨胶原，得到骨胶原粗品后，用0.5M醋酸溶解，将0.5M醋酸作为透析外液进行48-72透析，得到未变性I型骨胶原，直至透析液中没有检测出C1一。

3.如第1项所述的方法，其中，所述蛋白酶是酸性蛋白酶。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶是碱性蛋白酶。

5.如第1项所述的方法，其中，所述蛋白酶是中性蛋白酶。

6.根据第3项所述的方法，其中，所述酸性蛋白酶是胃蛋白酶。

7.根据权利要求4所述的方法，其中，所述碱性蛋白酶是胰蛋白酶。

8.根据第5项的方法，其中，所述中性蛋白酶是蛋白酶。

9.如权利要求1所述的方法，其中，所述中温条件为30到60摄氏度。C是..。

10.如第1项所述的方法，其特征在于，上述被控制的加水分解的胶原蛋白蛋白加水分解度为5-15%。

11.如权利要求1所述的方法，其中，所述胶原肽的分子 量为5~13。

12.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述胶原肽的氮溶解指数为98%以上。

13.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用上述制备方法制备的胶原肽用于延长动物寿命和抑制动物体内脂质褐质生成。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，在人的性食品和宠物中使用采用上述方法的葡萄糖多肽。

全文的摘要。

本发明以水产动物来源的未变性胶原蛋白质，特别是未变性I型胶原蛋白质为原料，在中温条件下经过酶分解、透析、干燥等特殊生化技术的制造方法，得到胶原蛋白质肽。所生成的胶原肽主要成分分子质量范围为5-13KD，氮溶解指数>98%，具有活性胶原肽的有效性和作用，具有显著延长动物寿命、抑制体内脂质体生成等特殊生理功能。作为功能因子添加剂，可广泛用于保健食品和宠物保健饲料添加剂。

文章ID：A23L1/305GK101275156SQ20081003721。

发布日期2008年10月1日申请日期2008年5月9日优先日期2008年5月9日。

发明者严如绍、刘承初、彭得翔、朱振乐、李家乐、李应森人：上海大学著作权声明：本文内容由互联网用户提供，此观点仅代表作者。本网站不拥有所有权，也不承担任何法律责任。如果发现侵权/违规内容，联系网站将立即删除。